临床助理医师医学微生物学资料:病毒感染的检查方法
来源：网络发布时间：2014-07-15
一、标本的采集与送检(principle of collection specimen)
1、采集急性期标本
2 、污染标本应用抗生素抑制标本中细菌或真菌的生长
3 、低温保存，快速送检
4、 血清学实验检查抗体(双分血清)
二、病毒的分离培养与鉴定
(一)病毒的分离培养
• 动物接种 选择易感动物及接种部位，观察发病情况
• 鸡胚培养 不同病毒选择不同接种部位(绒毛尿囊膜，尿囊腔，羊膜腔，卵黄囊)，分离流感病毒最常用。
• 细胞培养：分离病毒最常用的方法
(1)原代细胞—来源于动物、鸡胚、人胚组织细胞，对多种病毒敏感，但只能传2-3代。
(2)二倍体细胞—在体外分裂50-100代后仍保持2倍体染色体数目的单层细胞。
(3)传代细胞—能在体外无限传代的细胞多由癌细胞或二倍体细胞突变而来。
病毒在培养细胞中增殖的指标：
• 细胞病变效应(CPE)：即某些病毒在细胞内增殖引起的特有的细胞病变(细胞变圆、聚集、坏死、脱落等)
• 红细胞吸附
• 干扰现象
• 细胞代谢改变(pH)
(二)病毒的鉴定
核酸类型、理化性状、形态、血清学鉴定、基因测序和生物对比。
(三)病毒的数量与感染性测定
1.50%组织细胞感染量
2.红细胞凝集试验
3.空斑形成试验
三、病毒的血清学诊断
用已知病毒抗原检测病人血清中相应抗体以诊断病毒性疾病(中和实验、补体结合实验、血凝抑制实验、凝胶免疫扩散等)。
四、病毒的快速诊断
(一) 形态学
电镜和免疫电镜——直接观察病毒
光镜—— 大病毒 和包涵体
(二)检测病毒蛋白抗原
用已知特异性抗体直接检测病毒蛋白抗原(简便、敏感、特异)
常用方法：免疫荧光技术(IF)
固相放射免疫测定(SPRIT)
酶免疫技术(EIA)等。
(三) 检测病毒特异性IgM抗体
检测病毒特异性IgM抗体可诊断急性感染或证明病毒复制。
(四)检测病毒的核酸
1 核酸杂交
– 斑点杂交(dot hybridization)
– 原位杂交(in site hybridization)
– DNA印迹杂交(Southern blot)
– RNA印迹杂交 (northern blot)
2 核酸扩增
– 聚合酶链反应 (polymerase chain reaction，PCR DNA)
– 连接酶链反应(ligase chain reaction，LCR)
– 反转录PCR(Reverse transcrptase PCR，RT—PCR (RNA)
3 基因芯片技术(gene chip)
